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詳細介紹 - 套組原理
圖一 LDH套組原理說明圖
乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase, LDH)是一種穩定且幾乎所有已知細胞都含有之酵素。而細胞之毒性研究常以細胞膜的損傷來衡量,當細胞膜損傷,細胞內的LDH就會釋放到溶液中,因此,我們可藉由測量溶液中的LDH的濃度,來研究溶液中的物質對細胞的毒性。
如上圖一,本產品使用新一代的高靈敏性水溶性四氮唑鹽(water soluble tetrazolium salt, WST salt)作為LDH的呈色劑。LDH自損傷的細胞釋出後,將套組中的乳酸(lactate)與菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)催化,使之進行氧化還原反應,NAD+被還原成還原態NADH,NADH再進一步將四氮唑鹽還原成橘色水溶性之甲䐶(formazan),此產物在可見光吸收光譜波長450 nm處(OD450),產生強烈的變化,藉由光譜變化的多寡,便可計算溶液中的LDH濃度,得出損傷細胞的多寡。
圖二 本產品以A549細胞實測結果。 (以96孔盤乘裝,每孔 5000 隻細胞,使用含10%FBS之DMEM培養液。)